玉米アフラトキスの測定方法
アフラトキシン (Aflatoxin) は,ディフラニル環とクマリン (オキサナフトキノン) から成る化合物である.アスペルギルス・フラブスやアスペルギルス・パラシティクスなどの株によって生成される.,分子重量312〜346で,溶融点200〜300°C. 安定した高温耐性を持ち,長波紫外線下では発光する.B1に分かれていますB2,G1,G2,M1,M2,P1,R1,GM,および異なる熒光色,RF値,構造に応じて有毒アルコール
AFTは水,エタン,エーテル,石油エーテルに溶けないが,メタノール,エタノール,クロロホルム,アセトニトリル,ダイメチルホルマミドなどの有機溶媒に溶ける.AFTは,pHが1〜3の酸性溶媒でわずかに分解できる.塩基溶液で9〜10のpHで急速に分解し分解し,塩基溶液で9〜10のpHでほぼ無毒な塩分に分解する.酸性条件下では減少します.
実験の目的
アフラトキンは,真菌によって生成されるいくつかの高毒性がん性物質を指します.高用量の短期摂取 (1 mg/kg体重) は急性中毒を引き起こす可能性があります.発熱などの肝機能障害の症状低用量 (20 マイクログラム/kg 体重) に長期にわたって曝露すると,肝臓がん,胃がん,その他の疾患のリスクが著しく増加します.農作物や食品に広く存在し,人間や動物に大きな害を与えるため食品安全と公衆衛生の確保には,迅速かつ正確な検出方法の確立が非常に重要です.
この実験の目的は,固相酵素結合免疫吸収試料 (ELISA) の原理,すなわち酵素結合免疫吸収試料 (ELISA) を使用することです.標本中のアフラトキシンB1の含有量を制限し定量化するために食品汚染リスクの評価のための科学的基盤を提供する.
実験装置
1 ST-2000A ミコトキシン分析器
2 コーン,ホモゲナイザー,窒素乾燥装置,オシレーター,遠心機,段階ピペット,バランス (感度0.01g),マイクロピペット,メタノール,n-ヘキサン,クロロホルムまたは二塩化メタン反応体
実験手順
1 実験 に 使用 さ れ た 機器 が 清潔 で 乾燥 し て 汚染 さ れ ない こと を 確かめ て ください
2 メタノールと離子化水を7:3の比で混ぜてサンプル抽出溶液を調製する
3 2g の粉砕されたトウモロコシサンプルを取り,50ml の遠心分離管に入れて,サンプル抽出溶液の 5ml を加えて,室温 4000 rpm で 10 分間 5 分間揺さぶります.その後,0 を取る.5mlの上位剤を5mlの離子化水を加えて,よく混ぜます.
4 必要な試料を 4 °C の冷蔵環境から取り出し,室温で 30 分間平衡させ,よく揺さぶる.必要な数量のマイクロプレートとフレームを取り出し,濃縮洗浄溶液を20倍,離子化水で薄め,洗浄溶液を処理する.
5 サンプルとスタンダードの対応する微孔を順番に番号付け,各サンプルとスタンダードに2つの並列の井戸を作って,スタンダード井戸とサンプルの井戸の位置を記録する.各マイクロ孔に標準またはサンプルを50 μl/井戸に追加する.プレートを蓋膜で封印し,5秒間軽く揺さぶってよく混ぜます.25 °C で 30 分間反応する.
蓋膜を外し,穴内の液体を揺れて,穴ごとに250μlの作業洗剤で5回洗浄し,洗浄の間隔は30秒.吸い込み紙を使って乾かして
7 各井戸に基板溶液A (50 μl) を加え,その後基板溶液B (50 μl) を加え,5秒間揺さぶってよく混ぜます.25°Cで暗闇で15分色付けます.
各井戸に50 μlの終止溶液を加え,慎重に揺れて,反応を終了するためによく混ぜます.
アフラトキシン分析器を用いて各井戸の吸収値を450nmで測定する (双波長450/630nmが推奨される).反応終了後10分以内に測定を完了する.
10 計器は測定を完了し,自動的に結果を出します
実験結果
検査後,サンプル内のアフラトキシン含有量は約0.19ug/kgで,GB 2761-2017 "食品中の真菌毒素制限に関する国家食品安全基準"を満たしています.