マイコトキシンテスター ELISA 波長 400 - 999nm アフラトキシンB1検出 ST-2000A

ST-2000A マイコトキシン検出器

ST-2000A マイコトキシン分析計は、アフラトキシンおよびELISA（酵素免疫測定法）分析に不可欠な分析機器です。固相ELISA（酵素免疫測定法）の原理に基づき、本機器とB1キットを組み合わせて使用することで、サンプル中のアフラトキシンB1およびその他のマイコトキシンの含有量を限定的かつ定量的に測定できます（他のキットを使用すれば、他の毒素も検出可能です）。食品、飼料、油脂、乳製品、医薬品、飲料、ワインなどの製品におけるアフラトキシンB1およびその他のマイコトキシンの検出に広く使用されています。

性能特性:

1. 表示操作：カラー液晶画面、ビデオフォン配電盤、全プレート情報の表示、タッチスクリーン操作

2. 振動プレート機能：レベル3の振動プレート速度、時間0～255秒調整可能

3. ワークステーション：プロフェッショナルな酵素マーカーソフトウェア、500グループのプログラム、100,000件のサンプル結果を保存可能、吸光度、線形方程式、対数方程式、二次方程式、三次方程式、吸光度パーセント濃度対数方程式、スプライン関数、阻害率などの豊富な計算モードを提供

技術パラメータ:

1 原理と応用

本キットは、間接競合ELISA法を用いて、穀物、飼料などのサンプル中のアフラトキシンB1（AFB1）を検出します。キットは、カップリング抗原がプレコートされた酵素標識プレート、ホースラディッシュペルオキシダーゼ標識物、抗体、標準品、その他の適合試薬で構成されています。試験中、標準品またはサンプル溶液を加えると、サンプル中のアフラトキシンB1と酵素プレートにプレコートされた複合抗原が、抗アフラトキシンB1抗体をめぐって競合します。酵素標識物を添加した後、TMB基質を用いて発色させます。サンプル吸光度値は、サンプル中のアフラトキシンB1含有量と負の相関があります。標準曲線と比較することで、サンプル中のアフラトキシンB1の残留量を求めることができます。

2 技術指標

2.1 キット感度：0.03ppb（ng/ml）

2.2 反応モード：25℃、30分～15分

2.3 下限検出限界:

穀物...................................................... 0.15ppb

配合飼料.......................................... 0.3 ppb

食用油、ピーナッツ.................................... 0.6ppb

醤油、小麦およびその他の飼料.............................. 0.3 ppb

ビール.......................................... 0.3 ppb

ワイン、醤油、酢.................................... 0.15ppb

2.4 交差反応率:

アフラトキシンB1 100%

2.5 サンプル回収率:

穀物および配合飼料.............................. 85% ± 15%

ピーナッツ.................................... 82 ± 15%

食用油.................................... 85 ± 15%

醤油、小麦およびその他の飼料.............................. 83 ± 15%

ビール.................................... 84 ± 15%

ワイン、醤油、酢............ 87 ± 15%

3 キット構成

酵素標識プレート.................................... 96ウェル

標準溶液（黒キャップ）：各1ml

0ppb、0.03ppb、0.06ppb、0.12ppb、0.24ppb、0.48ppb

高標準溶液：100ppb.............................. 1ml

酵素標識物（赤キャップ）............................. 5.5ml

抗体ワーキング溶液（青キャップ）............................. 5.5ml

基質溶液A（白キャップ）............................. 6ml

基質溶液B（黒キャップ）............................. 6ml

終止液（黄キャップ）............................. 6ml

20X濃縮洗浄液（白キャップ）.................... 40ml

取扱説明書.....................1部

4 必要機器および試薬

4.1 機器：アフラトキシン検出器、プリンター、ホモジナイザー、窒素乾燥装置、振盪機、遠心分離機、メスピペット、天秤（感度0.01g）

4.2 マイクロピペット：シングルチャンネル20μl～200μl、100μl～1000μl、マルチチャンネル300μl

4.3 試薬：メタノール、n-ヘキサン、トリクロロメタンまたはジクロロメタン

5 サンプル前処理

5.1 サンプル前処理前の注意事項:

実験器具は清潔にし、汚染や実験結果への干渉を避けるために使い捨て吸引ヘッドを使用してください。

5.2 溶液調製:

溶液1：サンプル抽出液

70%メタノール、すなわちVメタノール：V脱イオン水=7:3。

5.3 サンプル前処理手順:

5.3.1 穀物処理方法

1) 粉砕したサンプル2gを50ml遠心分離管に秤量し、サンプル抽出液5mlを加え、5分間振盪し、室温で4000rpm/10分間遠心分離する。

2) 上澄み0.5mlを採取し、脱イオン水0.5mlを加え、よく混合する。

3) 50μlを分析に用いる。

サンプル希釈倍率：5 下限検出限界：0.15ppb

5.3.2 トウモロコシの皮やふすまなどの吸水性の高いサンプルの処理方法

1) 粉砕したサンプル2gを50ml遠心分離管に秤量し、サンプル抽出液20mlを加え、5分間振盪し、室温で4000rpm/10分間遠心分離する。

2) 上澄み0.5mlを採取し、脱イオン水0.5mlを加え、よく混合する。（毒素含有量が極めて高いサンプルは、35%メタノールで希釈して試験することができます。例えば、2)の混合液0.1mlと35%メタノール0.9mlを混合して使用します。最終的なサンプル希釈倍率は200、検出限界は6ppbです。）

3) 50μlを分析に用いる。

サンプル希釈倍率：20 下限検出限界：0.6ppb

注意：サンプル中の毒素の分布は不均一であるため、複数の地点からサンプルを採取し、十分に混合してから2gを試験に用いる必要があります。

5.3.3 配合飼料の処理方法

1) 粉砕したサンプル2gを50ml遠心分離管に秤量し、サンプル抽出液10mlを加え、5分間振盪し、室温で4000rpm/10分間遠心分離する。

2) 上澄み0.5mlを採取し、脱イオン水0.5mlを加え、よく混合する。

3) 50μlを分析に用いる。

サンプル希釈倍率：10 下限検出限界：0.3ppb

5.3.4 食用油、ピーナッツ、高脂肪サンプルの処理方法

1) 粉砕したサンプル2gを50ml遠心分離管に秤量し、n-ヘキサン8mlとサンプル抽出液10mlを加え、5分間振盪し、室温で4000rpm/10分間遠心分離する。

2) 上層液を除去し、下層液0.5mlを採取して脱イオン水0.5mlを加え、よく混合した後、混合液0.5mlを採取し、35%メタノール0.5mlを加えて30秒間振盪する。

3) 50μlを分析に用いる。

サンプル希釈倍率：20 下限検出限界：0.6ppb

5.3.5 ソース、小麦、ビスケット、ペストリーなどの食品または調味料、および飼料濃縮物などの飼料の処理方法

1) 粉砕したサンプル2gを50ml遠心分離管に秤量し、サンプル抽出液10mlを加え、5分間振盪し、室温で4000rpm/10分間遠心分離する。

2) 上澄み2mlを採取し、トリクロロメタン（またはジクロロメタン）4mlを加え、5分間振盪し、室温で4000rpm/10分間遠心分離する。

3) 上層液を別の容器に移し、下層液を待機させる。上層液にさらにクロロホルム（またはジクロロメタン）4mlを加え、5分間十分に振盪混合し、室温で4000rpm/10分間遠心分離する。

4) 上層液を除去し、2回の下層液を合わせて十分に混合する。

5) 混合した下層液2mlを採取し、50～60℃の窒素下で乾燥させる。

6) サンプル抽出液0.5mlを加えて乾燥物を完全に溶解させ、その後脱イオン水0.5mlを加えて混合する。

7) 50μlを分析に用いる。

サンプル希釈倍率：10 下限検出限界：0.3ppb

5.3.6 ビール処理方法

1) ビールを十分に撹拌してCO2を除去し、ビールサンプル2mlを採取し、蒸留水1ml、メタノール7mlを加えて5分間振盪する。

2) 混合サンプル溶液0.5mlを採取し、脱イオン水0.5mlを加えてよく混合する。

3) 50μlを分析に用いる。

サンプル希釈倍率：10 下限検出限界：0.3ppb

5.3.7 ワイン、醤油、酢の処理方法

1) サンプル2mlを採取し、蒸留水2ml、トリクロロメタン（またはジクロロメタン）10mlを加えて5分間振盪し、室温で4000rpm/10分間遠心分離する。

2) 下層液1mlを採取し、50～60℃の窒素下で乾燥させる。

3) サンプル抽出液0.5mlを加えて乾燥物を完全に溶解させ、その後脱イオン水0.5mlを加えてよく混合する。

5) 50μlを分析に用いる。

サンプル希釈倍率：5 下限検出限界：0.15ppb

6 ELISAの手順

必要な試薬を4℃の冷蔵環境から取り出し、室温で30分以上放置します。洗浄液が低温で結晶化している場合は、室温に戻して完全に溶解させる必要があります。各液体試薬は使用前に振盪してください。必要な数のマイクロプレートとフレームを取り出し、未使用のマイクロプレートは自己密封バッグに入れ、2～8℃で保管してください。

実験前に、20倍濃縮洗浄液を20倍に希釈してワーキング洗浄液を作成します。

6.1 番号付け：サンプルと標準品の対応するウェルに順番に番号を付け、各サンプルと標準品について2つの平行ウェルを作成し、標準ウェルとサンプルウェルの位置を記録します。

6.2 サンプル添加反応：それぞれのウェルに標準品またはサンプルを50μl/ウェル添加し、次に酵素標識物を50μl/ウェル添加し、次に抗体ワーキング溶液を50μl/ウェル添加します。プレートをカバーフィルムで密封し、5秒間軽く振盪して混合し、25℃で30分間反応させます。

6.3 洗浄：カバーフィルムを慎重に取り外し、ウェル内の液体を乾燥させ、ワーキング洗浄液250μl/ウェルでウェルを5回洗浄します。各洗浄の間隔は30秒とし、吸収紙でパッティングして乾燥させます（パッティング後に除去されなかった気泡は、清潔なガンヘッドで突き刺すことができます）。

6.4 発色：各ウェルに基質溶液Aを50μl、基質溶液Bを50μl添加し、5秒間軽く振盪してよく混合し、25℃で15分間暗所で発色させます。

6.5 終止：各ウェルに終止液50μlを添加し、軽く振盪してよく混合し、反応を終止させます。

6.6 吸光度測定：アフラトキシン検出器を使用して、各ウェルの吸光度を450nmで測定します（二波長450/630nmを推奨）。測定は反応終止後10分以内に完了する必要があります。

6.7 ST-2000A自動アフラトキシン検出器は、測定を自動的に完了し、結果を自動的に生成します。